بهینه سازی روش استخراج DNA در Amygdalus spp

نویسندگان

1 دانشجو کارشناسی ارشد دانشگاه تبریز

2 عضو هیات علمی موسسه تحقیقات جنگلها و مراتع،تهران

چکیده

مقاله حاضر به ارائه روشی ساده جهت استخراج DNA ژنومی از گیاهان دارای متابولیتهای ثانویه زیاد می پردازد. در این روش برگهای جوان و برگهای نسبتاً مسن از گونه های مختلف بادام وحشی و نیز ارقام اهلی، به عنوان مواد گیاهی، مورد بررسی قرار گرفتند. دراین روش ازSDS به جای CTAB که عمدتاً برای استخراج DNAگیاهان حاوی پلی ساکارید زیاد بکارمیرود و نیز سارکوسیل که دارای هزینه نسبتاً بالایی می باشند، نمک NaCI با غلظت نسبتاً زیادی جهت حذف پلی ساکاریدها،PVPبه منظور حذف موادپلی فنلی، RNase برای از بین بردن RNAو دوتا سه مرتبه استخراج به وسیله کلروفرم: ایزوآمیل الکل،استفاده گردید.میانگین عملکرد DNA بدست آمده ازاین روش به صورت PG/G50 بافت برگی PG/G70 بافت برگی جوان و 30 میکروگرم بر گرم بافت برگی نسبتاً مسن)بوده. DNAاستخراج شده بدین روش ازتقریباًMG100 برگ گیاه، با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر ونیز ژل آگارز آزمایش (ارزیابی) گردیدوکیفیت و کمیت مناسب ومقابل قبولی را نشان داد. تمامی این DNAها به طور کاملاً موفقیت آمیزی درواکنشهای PCR(به میزانng/pl5/. محلول واکنش) قابل تکثیربودند بنابراین به دلیل سادگی،کمیت وکفیت مناسبDNAبدست آمده وهزینه نسبتاً کمتر، استفاده ازاین روش برای سایرگیاهان خانوادهRosaceaeواحتمالاً خانواده دیگری که استخراج DNAآنها با مشکل همراه است مفید خواهد بود.

کلیدواژه‌ها

مراجع

clarck M. s., lggT. Plant molecular biology-A laboratory manual.
Bio Techniques, 13: 52-56.50'
porebski, s., L. G. Bailey and B. R. Baum, 1997. Modification fo a cTAB
DNA extraction protocol for plants containing high polysaccharide
and polyphenol components. Plant. Mol. Bio. Rep' l5: 8-15'
Tabaei-Aghdaei. S. R., 1997. Studies of stress responses in Gramineae
(Foaceae) Using biotechnological methods. PhD thesis, Newcastle
University, UK.
Wang, X. D., Z.P.Wangand Y. P. Zou,. 1996. An improved procedure for
the isolation of nuclear DNA from leaves of wild grapevine dried
with Silica gel. Plant Mol. Bio. Rep., 14: 369-373-
weir B. J., R. G. St. Piene and R. N. chibbar, 1996. Isolation of DNA for
RAPD analysis from leaves of saskatoon (Amelanchier alnifolia

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار